Diabetologia：激活但功能损坏的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出新来胰脏自身HIV到显现出新来1型号乳癌流行病学病征的成效部将在学龄前中后期就有很好的描绘出，多个胰脏自身HIV非典型的学龄前中所有70%在肝细胞转换后10年底中风乳癌，而随访15年的学龄前这一人口比例减低到84%。远比之下，占流行病学1型号乳癌一半以上的型号1型号乳癌的发病机制还很难得到更进一步的研究工作。

日渐多的人开始常用分段系统来定义1型号乳癌的成效：幼体在显现出新来多种胰脏自身HIV时转至第1阶段，显现出新来血糖异常时转至第2阶段，显现出新来病征时转至第3阶段。一些多发胰脏自身HIV非典型的幼体，在1期和2期，成效更快，并发展为发病的1型号乳癌。我们早先描绘出了一各别在首次探测到多种胰脏自身HIV样本后至更为少10年无乳癌的以致于快成效者，这各别患儿人数更为少，但前提特征更加明确。随后，我们发现胰脏自身抗体特异性CD8+T细胞膜自由基在成效很更慢的患儿中所前提不存在，但在近期发病和起因于的乳癌患儿中所很容易探测到。这可能证明，与成效患儿远比，这些患儿诱发自由基的调节减更慢。

中期研究工作证明，尽管调节性T细胞膜(Treg)存量情况下，但乳癌患儿存在一些机制局限性，其中所最主要对IL-2的自由基能够减低。此外，乳癌患儿中所的畸变CD4+T细胞膜可能对调节更为具抵抗性，表现为畸变T细胞膜的消除减弱，自然显现出新的Treg和粘液显现出新的诱发Treg，以及抗体亲身经历的CD4+T细胞膜中所IL-2自由基减弱。本研究工作的目地是描绘出了CD4+调节性T细胞膜(Treg)在在在以致于很更慢成效者中所的前提特征，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群为了将的主干研究工作，在21岁不限发病的患儿亲属中所检查1型号乳癌的危险诱因。我们早先描绘出了长期很更慢成效者的前提特征，他们保持稳定多重胰脏自身HIV非典型超过10年，但很难显现出新来乳癌的流行病学病征，更慢性或非透过性诱发。随后，10名继续保持稳定无乳癌并愿意包括大量体内样本的很更慢成效者设为T和B细胞膜机制统计分析。在目前的研究工作中所，8名更慢成效者(SP各别)，中所位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身HIV非典型。所有的参与者都受制于1型号乳癌成效的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身HIV对某些抗体的非典型自由基，然而，一名患儿早就受制于2期至更为少6年，但很难显现出新来流行病学病征，一名患儿被诊断为乳癌，该受试者72岁，在采集物理样本时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中所对该遗传物质透过了实际上审核。分离外周血单个核自由基细胞膜(PBMCs)，采用多模板流式细胞膜精和T细胞膜消除试制审核遗传物质中所Treg的频带、变异号和机制。常用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、表征和回归)透过无都由聚类统计分析，审核Treg变异号。

结果：与身心健康遗传物质远比，来自更慢成效体的清醒CD4+T细胞膜的都由聚类辨识，转录的清醒CD4+ Treg频带减低，与糖皮质激素诱发的TNFR相关蛋白(GITR)隐含减低有关。一名HbA1c增高的患儿与成效很更慢者和冗余的对照各别远比，Treg谱有所不尽相同。机制统计分析证明，与身心健康遗传物质远比，来自很更慢成效体的Treg抑制的CD4+畸变T细胞膜消除明显损伤。表现为对畸变CD4+T细胞膜CD25和CD134隐含的消除减低。

三幅1 了解的变异号统计分析辨识，CD4+Treg亚型号在更慢成效表头中所减低。由FlowSOM转化的Treg室，汇聚在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据上标物隐含认定出新10个元簇:清醒T细胞膜_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞膜;HLA-DR + GITR +清醒T细胞膜;终点站程Treg_1;终点站程Treg_2;终点站程Treg_3;和终点站程Treg_4。(a)常用9个不尽相同Treg上标转化的10个元簇的MST。每个端口代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更为大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在端口各别区域内上色。每个端口中所的饼三幅坚称单个上标的隐含最高级别。(b)每个元聚类的热三幅，以辨识整体上标隐含。(c, d)为HD各别(c)和SP各别(d)转化三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对稀土元素为每个metacluster罐终点站三幅(稀土元素> 0.05%)考虑到为HD和SP各别:终点站程Treg_2 (e),终点站程Treg_3 (f),终点站程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞膜(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞膜(l)。浅蓝色红色代表慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 常用CITRUS的预测模型号证实，Treg频带的减低是成效很更慢的标志。分级旁路(a - f)和柑橘统计分析(g-k)来得SP参与者和冗余的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群体的代表性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR隐含透过分离，模拟FlowSOM社会群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)各别以及遗传物质SP 606(浅蓝色)中所CD25+ cd127的频带概要三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路子集的罐终点站三幅;(c) HLA-DRloGITR−(终点站程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(终点站程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(终点站程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+终点站程T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，箭头突出新的簇被识别为SP和HD表头之间的不尽相同。(j)罐终点站三幅辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)各别中所，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对稀土元素(人口比例)。(k)直方三幅辨识每个簇的变异号(黄色)和Treg上标相对隐含与故事情节隐含(粉红色);上列，终点站程Treg_3;下面一行，终点站程Treg_4。故事情节与所有其他簇中所上标的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与身心健康献血者远比，成效很更慢者清醒treg的GITR减低。每个清醒CD4+T细胞膜元簇(清醒T细胞膜_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞膜;HLA-DR + GITR +清醒T细胞膜;终点站程Treg_2;终点站程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个隐含上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的隐含热三幅(sp606不最主要在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR隐含接在，辨识直方三幅(c)和概要三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有遗传物质最主要，p< 0.05(粉红色)遗传物质SP 606和冗余的HD不最主要在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR隐含，从分级旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(浅蓝色)接在，辨识直方三幅(e)和概要三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自很更慢成效的CD4+ treg细胞膜支配畸变CD4+T细胞膜的能够减低。SP各别用粉红色的终点站和红色坚称，HD各别用黄色的终点站和红色坚称，浅蓝色的终点站/红色坚称遗传物质sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被上标为CFSE, Treg按注意到的人口比例试样。用抗CD3 /28微珠激活细胞膜，培育出3天内透过流式细胞膜精探测。(a-d)与CD4+接收者者相对应的treg培育出(增生)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培育出。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE消除多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除多于。常用非典型对照(转录的响应细胞膜含treg)计算消除多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

三幅5 畸变CD4+T细胞膜对很更慢成效的T细胞膜激活的消除更为敏感。SP各别用粉红色的终点站和红色坚称，HD各别用黄色的终点站和红色坚称，浅蓝色的终点站/红色坚称遗传物质sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上标，treg按注意到的人口比例试样。用抗CD3 /28微珠激活细胞膜，培育出3天内透过流式细胞膜精(CD25反染)和细胞膜因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者协力培育出。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE消除次之(b)。(c,d) CD25消除次之(c)和CD134消除次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中所的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

事实：我们计算出来新的事实是，来自很更慢成效子的激活清醒CD4+Treg在GITR隐含中所得到了引入和充沛，重申了全面性研究工作Treg在1型号乳癌高风险幼体中所的异质性的全面性。

译者出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28